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原理是将两种DNA分子通过限制性内切酶和连接酶拼接到一起发挥作用 。
重组DNA技术是指将一种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内 ,使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序,也称为分子克隆技术。因此,供体、受体 、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 。例如 ,如果运载体是质粒,受体细胞是细菌。
一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性 ,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌的繁殖速度非常快 ,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
扩展资料:
基因工程利用重组技术,在体外通过人工“剪切 ”和“拼接”等方法,对各种生物的核酸(基因)进行改造和重新组合 ,然后导入微生物或真核细胞内,使重组基因在细胞内表达,产生出人类需要的基因产物 ,或者改造、创造新特性的生物类型 。
从实质上讲,基因工程的定义强调了外源DNA分子的新组合被引入到一种新的寄主生物中进行繁殖。这种DNA分子的新组合是按工程学的方法进行设计和操作的,这就赋予基因工程跨越天然物种屏障的能力,克服了固有的生物种间限制 ,扩大和带来了定向改造生物的可能性,这是基因工程的最大特点。
基因重组包括:
第一种,减数第一次分裂的前期 ,同源染色体的非姐妹染色单体交叉互换 。
第二种,减数第一次分裂的后期,随着等位基因的分离 ,非同源染色体上的等位基因自由组合。
发生重组的必须条件是两条DNA链的互补性,每条染色单体包含一条长的双链DNA,发生重组的断裂位点依赖于位点附近碱基的互补配对。
当双链中的一条链与另一条双链的一条链发生交叉时 ,将形成一条杂合DNA 。每个重组包括左侧亲本双链体DNA通过一段杂合DNA与右侧的另一条亲本双链体相连。
基因重组特点:
基因重组的特点是双DNA链间进行物质交换。真核生物,重组发生在减数分裂期同源染色体的非姊妹染色单体间,细菌可发生在转化或转导过程中 ,通常称这类重组为同源重组,即只要两条DNA序列相同或接近,重组可在此序列的任何一点发生 。
然而在原核生物中,有时基因重组依赖于小范围的同源序列的联会 ,重组只限于该小范围内,只涉及特定位点的同源区,把这类重组称作位点专一性重组。
此外还有一种重组方式 ,完全不依赖于序列间的同源性,使一段DNA序列插入另一段中,在形成重组分子时依赖于DNA复制完成重组。
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